在色譜柱清洗開始和結(jié)束時(shí)，都應(yīng)按照色譜柱檢測(cè)報(bào)告中所列的實(shí)驗(yàn)條件對(duì)色譜柱測(cè)量柱效、容量因子等，以確保色譜柱得到清洗，柱效得到提高。
在所有情況下(除非另有說(shuō)明)，一般使用40-60倍柱體積的溶劑。需確保色譜柱上沒(méi)有緩沖液或樣品，且清洗前色譜柱中的殘留溶劑應(yīng)與第一種清洗溶劑混溶。清洗后，確保流動(dòng)相可與色譜柱中的殘留溶劑混溶。
正相色譜柱
1. 用四氫呋喃沖洗
2. 用甲醇沖洗
3. 用四氫呋喃沖洗
4. 用二氯甲烷沖洗
5. 用無(wú)苯正己烷沖洗
反相色譜柱
1. 用 HPLC 級(jí)水沖洗，在沖洗過(guò)程中注入4等分共 200μL 的 DMSO
2. 用甲醇沖洗
3. 用氯仿沖洗
4. 用甲醇沖洗
陰離子交換色譜柱
1. 用 HPLC 級(jí)水沖洗
2. 用 50mM 到 1M 的適當(dāng)緩沖液進(jìn)行梯度沖洗
3. 用 HPLC 級(jí)水沖洗
4. 用甲醇沖洗
5. 用氯仿沖洗
陽(yáng)離子交換色譜柱
1. 用HPLC級(jí)水沖洗，在沖洗過(guò)程中注入 4 等分共 200μL 的 DMSO
2. 用四氫呋喃沖洗
蛋白體積排阻色譜柱
從蛋白體積排阻填料中移除污染物有兩種清洗/再生方法
弱保留蛋白
1. 用30mL 0.1M 磷酸鹽緩沖液 (pH 3.0) 沖洗
強(qiáng)保留蛋白
2. 用 100% 水到 100% 乙腈梯度沖洗60分鐘
多孔石墨碳色譜柱
多孔石墨碳有四種清洗或再生方法。使用哪種方法取決于分析物以及對(duì)應(yīng)的流動(dòng)相
1.酸/堿清洗：用水相比例較高的流動(dòng)相分析離子化合物時(shí)
1.1 反接色譜柱
1.2 用 50mL 包含 0.1% 三氟乙酸的四氫呋喃:水 (1:1) 溶液沖洗
1.3 用 50mL 包含 0.1% 三乙胺或氫氧化鈉的四氫呋喃:水 (1:1) 沖洗
1.4 用 50mL 包含 0.1% 三氟乙酸的四氫呋喃:水 (1:1) 溶液沖洗
1.5 用 70 倍柱體積的 THF 沖洗
1.6 用甲醇/水 (95:5) 沖洗以重新平衡
1.7 重新倒轉(zhuǎn)色譜柱方向
2.強(qiáng)有機(jī)溶劑清洗
用水相比例較高的流動(dòng)相分析極性和/或離子化化合物時(shí)
2.1 用 50mL 丙酮沖洗
2.2 用 120mL 二丁醚沖洗
2.3 用 50mL 丙酮沖洗
2.4 用水溶液流動(dòng)相沖洗直到達(dá)到平衡
3．正相模式的清洗
適用于使用正相流動(dòng)相進(jìn)行分析的應(yīng)用。
3.1 用 50mL 二氯甲烷沖洗
3.2 用 50mL 甲醇沖洗
3.3 用 50mL 水沖洗
3.4 用 50mL 0.1M 鹽酸沖洗
3.5 用 50mL 水沖洗
3.6 用 50mL 甲醇沖洗
3.7 用 50mL 二氯甲烷沖洗
3.8 用流動(dòng)相沖洗直到達(dá)到平衡
4. 移除 TFA 和 DEA
TFA 和DEA可能吸附于多孔石墨碳表面；在流動(dòng)相中使用這些添加劑后，應(yīng)對(duì)色譜柱進(jìn)行再生以確保始終實(shí)現(xiàn) Hypercarb的原始選擇性和最佳性能。
再生程序如下：
4.1 移除 TFA：用 70 倍柱體積的 THF 沖洗。
4.2 移除 DEA：將柱溫設(shè)為75℃，然后用120倍柱體積的ACN 沖洗。
帶金屬對(duì)離子的聚合物介質(zhì)色譜柱
對(duì)于帶金屬對(duì)離子的聚合物柱，有三種再生方法。下表詳細(xì)列出了各種再生方法。
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色譜柱類型
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金屬污染
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有機(jī)污染
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柱清潔
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氫型
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反接色譜柱，以 0.1mL/min 的流速，用 0.1M H2SO4 在 25℃ 條件下重新 4到 16 小時(shí)
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反接色譜柱，以 0.1mL/min 的流速，用 20:80 ACN: H2O在 25℃條件下沖洗 4 小時(shí)
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反接色譜柱，以 0.1mL/min 的流速，用 20:80 ACN: 0.01M H2SO4 在 65℃ 條件下沖洗 4 小時(shí)
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鈣型
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反接色譜柱，以 0.1mL/min 的流速，用 0.1M Ca(NO3)2 在pH 6.3 和85℃條件下沖洗4到 16小時(shí)
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反接色譜柱，以 0.1mL/min 的流速，用 20:80 ACN: H2O 在 25℃ 條件下沖洗4小時(shí)
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反接色譜柱，以 0.1mL/min 的流速，用 20:80 ACN: H2O 在 25℃ 條件下沖洗 4 小時(shí)
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鈉型
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反接色譜柱，以 0.1mL/min 的流速，用 0.1M NaNO3 在85℃條件下沖洗 4到16小時(shí)
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反接色譜柱，以 0.1mL/min 的流速，用 20:80 ACN: H2O在 25℃ 條件下沖洗4小時(shí)
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反接色譜柱，以 0.1mL/min 的流速，用 20:80 ACN: H2O 在25℃條件下沖洗4小時(shí)
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鉛型
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反接色譜柱，以 0.1mL/min 的流速，用 0.1M Pb(NO3)2 在 pH 5.3 和85℃條件下沖洗 4 到 16 小時(shí)
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反接色譜柱，以 0.1mL/min的流速，用 20:80 ACN: H2O在 25℃ 條件下沖洗4 小時(shí)
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反接色譜柱，以 0.1mL/min 的流速，用 20:80 ACN: H2O 在 25℃ 條件下沖洗4小時(shí)
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